Plásmido Doble Nickase (h) GABA_A Rα3: sc-403044-NIC

GABRA3 codifica la subunidad α3 del receptor humano de ácido γ-aminobutírico tipo A (GABAARα3), un componente de un canal de cloruro activado por ligando que media la neurotransmisión inhibidora rápida en el sistema nervioso central. La incorporación de α3 en los receptores GABAA pentaméricos influye en la cinética del canal, la señalización sináptica frente a la extrasináptica y la excitabilidad neuronal mediante la conductancia de cloruro y la regulación del potencial de membrana. La señalización GABAérgica a través de los receptores GABAA se integra con vías de modulación dependiente de fosforilación, tráfico de receptores y organización sináptica que configuran las oscilaciones de red y la formación de circuitos durante el desarrollo. La expresión o función alteradas de subunidades del receptor GABAA, incluida GABRA3, se estudian en el contexto de fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como de mecanismos relacionados con las crisis epilépticas.

GABAA Rα3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GABRA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GABRA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GABRA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GABRA3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.