Plásmido CRISPR de Activación (h) GABA_A Rα3: sc-403044-ACT

GABRA3 codifica la subunidad alfa 3 del receptor humano de ácido γ-aminobutírico tipo A (GABAARα3), un componente de un canal de cloruro activado por ligando que media la neurotransmisión inhibitoria rápida. La incorporación de la subunidad α3 en los receptores GABAA pentaméricos modula la apertura y cierre del canal, su farmacología y el tono inhibitorio sináptico frente al extrasináptico, influyendo en la excitabilidad neuronal y en las oscilaciones de la red. GABAARα3 participa en la función de las sinapsis GABAérgicas y en procesos neurodesarrollativos más amplios, como el crecimiento de neuritas y la maduración de circuitos, mediante señalización dependiente de la actividad. La alteración de la expresión de GABRA3 o un desequilibrio en la señalización inhibitoria se ha asociado en investigaciones con fenotipos neurológicos y estados relevantes para enfermedad, en los que la disrupción del equilibrio excitación–inhibición contribuye a la fisiopatología.

GABAA Rα3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GABRA3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GABAA Rα3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GABRA3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GABRA3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GABAA Rα3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GABRA3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GABAA Rα3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GABAA Rα3 en células tumorales con expresión de GABRA3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.