GABA_A Rα2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402715

Übersicht

GABRA2 kodiert die α2‑Untereinheit des humanen GABA\(_A\)-Rezeptors, eines pentameren, ligandengesteuerten Chloridkanals, der die schnelle inhibitorische Neurotransmission im zentralen Nervensystem vermittelt. Rezeptoren mit GABA\(_A\)Rα2 prägen die synaptische Inhibition, die neuronale Erregbarkeit und Netzwerkoszillationen, indem sie die GABA-Bindung an einen Chloridfluss und eine Hyperpolarisierung der Membran koppeln. Diese Untereinheit trägt zur Assemblierung des Rezeptors, zu seinem Transport (Trafficking) und zur synaptischen Lokalisation bei und ist in Signalprozesse eingebunden, die die Ionenhomöostase und die aktivitätsabhängige Plastizität regulieren. Genetische und funktionelle Störungen von GABRA2 wurden mit neuropsychiatrischen sowie anfallsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Untersuchungen einer gestörten inhibitorischen Schaltkreisfunktion unterstreicht.

Das GABAA Rα2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GABRA2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GABRA2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GABRA2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GABAA Rα2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GABRA2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GABAA Rα2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GABRA2-Exone abzielen, die für die GABAA Rα2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GABRA2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GABAA Rα2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GABAA Rα2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GABRA2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GABAA Rα2 HDR-Plasmid (h) und GABAA Rα2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GABRA2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GABRA2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.