Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
G9a Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430994
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- G9a El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico G9a, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: G9a Anticuerpo (C-9): sc-515726
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
G9a Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-430994 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Ehmt2 de ratón codifica la metiltransferasa de lisina de histonas G9a, uno de los principales “escritores” de la mono- y dimetilación de H3K9, que ayuda a establecer estados de cromatina represivos en la eucromatina. G9a coordina programas de silenciamiento transcripcional implicados en el desarrollo embrionario, el compromiso de linaje y el mantenimiento de la identidad celular al asociarse con reguladores de la cromatina como GLP (EHMT1) y factores vinculados a la heterocromatina. A través de sus efectos sobre la accesibilidad de la cromatina y la expresión génica, EHMT2 influye en las respuestas al daño del ADN, el tiempo de replicación y la estabilidad epigenética. La actividad desregulada de G9a y los patrones de H3K9me2 se estudian ampliamente en el contexto de la biología tumoral, los fenotipos del neurodesarrollo y la regulación de genes inflamatorios, lo que convierte a Ehmt2 en un nodo clave para la investigación centrada en epigenética.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO G9a (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ehmt2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ehmt2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ehmt2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína G9a.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ehmt2 para la investigación de la señalización de G9a, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ehmt2 críticos para la función de G9a
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ehmt2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido G9a CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido G9a CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ehmt2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR G9a (m) y el plásmido HDR G9a (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ehmt2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ehmt2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.