Plásmido CRISPR de Activación (h) G6PT: sc-406483-ACT

El gen humano **SLC37A4** codifica el **transportador de glucosa-6-fosfato (G6PT)**, una proteína de membrana del retículo endoplásmico que importa glucosa-6-fosfato al lumen del RE para sostener la actividad de la **glucosa-6-fosfatasa** y la homeostasis metabólica. Este paso de transporte es fundamental para la **glucogenólisis** y la **gluconeogénesis**, ya que conecta el flujo de carbohidratos citosólico con el manejo de fosfato localizado en el RE y con las vías de producción de glucosa. La función de G6PT influye en el equilibrio energético intracelular y en las respuestas celulares a la disponibilidad de nutrientes, con efectos posteriores sobre el metabolismo de neutrófilos y hepatocitos. Las variantes patogénicas de **SLC37A4** se asocian con la **enfermedad de almacenamiento de glucógeno tipo Ib**, lo que convierte a este locus en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de la desregulación metabólica y de fenotipos relacionados con la inmunidad.

G6PT El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC37A4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

G6PT El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC37A4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC37A4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de G6PT. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC37A4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de G6PT en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía G6PT en células tumorales con expresión de SLC37A4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.