G6Pase-α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420443

Descripción general

G6pc codifica la glucosa-6-fosfatasa alfa (G6Pasa-α), una enzima de membrana del retículo endoplásmico que cataliza el paso terminal de la gluconeogénesis y la glucogenólisis al hidrolizar la glucosa-6-fosfato para generar glucosa libre y fosfato inorgánico. En el hígado, el riñón y el epitelio intestinal del ratón, la G6Pasa-α contribuye a la homeostasis de la glucosa en ayuno y se integra con vías que controlan el recambio de glucógeno, la producción hepática de glucosa y el metabolismo de carbohidratos localizado en el RE. La alteración de la actividad de la G6Pasa-α se vincula mecánicamente con fenotipos de almacenamiento de glucógeno y desregulación metabólica, lo que convierte a G6pc en una diana clave para estudiar el manejo de la glucosa y las respuestas al estrés hepatometabólico. Los modelos de G6pc también se utilizan para investigar el control transcripcional y hormonal de los programas gluconeogénicos y la función de enzimas de membrana del RE.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO G6Pase-α (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen G6pc en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del G6pc junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de G6pc tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína G6Pase-α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en G6pc para la investigación de la señalización de G6Pase-α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de G6pc críticos para la función de G6Pase-α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de G6pc para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido G6Pase-α CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido G6Pase-α CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus G6pc. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR G6Pase-α (m) y el plásmido HDR G6Pase-α (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología G6pc para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana G6pc definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.