Partículas Lentivirales de Activación (m) G530011O06Rik: sc-437289-LAC

El gen murino G530011O06Rik codifica una proteína en gran medida no caracterizada y con anotación funcional limitada, que se estudia con frecuencia en el marco de análisis transcriptómicos y de biología de sistemas para identificar nuevos reguladores del estado celular. Los datos de expresión disponibles sugieren una regulación dependiente del contexto, lo que podría reflejar funciones en procesos básicos como el control transcripcional, el metabolismo del ARN o redes génicas asociadas a la señalización. Dado que la asignación del gen a vías biológicas sigue estando incompletamente definida, a menudo se emplean estudios basados en perturbaciones para cartografiar los programas transcripcionales aguas abajo y las vías de interacción. Los patrones de expresión alterados de genes RIKEN poco caracterizados como G530011O06Rik se investigan comúnmente como biomarcadores o moduladores en modelos relevantes de enfermedad, incluidos la inflamación, el estrés metabólico y fenotipos neurobiológicos, sin que ello implique causalidad.

Las partículas de activación lentiviral G530011O06Rik (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de G530011O06Rik en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral G530011O06Rik (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción G530011O06Rik, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de G530011O06Rik. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo G530011O06Rik y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.