Partículas Lentivirales de Activación (h) G3BP1: sc-400745-LAC

G3BP1 (proteína de unión a la proteína activadora de la GTPasa Ras 1) es una proteína de unión a ARN que actúa como nucleador central de los gránulos de estrés citoplasmáticos, coordinando la selección/clasificación de ARNm, la represión de la traducción y la estabilidad del ARN durante el estrés celular. A través de sus dominios RRM y RGG, G3BP1 integra la señalización y el metabolismo del ARN al participar en vías vinculadas a respuestas inmunitarias innatas antivirales, señalización MAPK/ERK y remodelación de RNP. También se relaciona con programas de daño del ADN y estrés de replicación mediante la regulación del destino de los transcritos y de redes de interacciones proteína-proteína que determinan decisiones de supervivencia celular. La actividad desregulada de G3BP1 se ha asociado con una dinámica anómala de los gránulos de estrés y con circuitos alterados de regulación del ARN observados en cáncer, neurodegeneración e interacciones virus–hospedador, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de fenotipos de adaptación al estrés.

Las partículas de activación lentiviral G3BP1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de G3BP1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral G3BP1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción G3BP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de G3BP1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo G3BP1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.