Plásmido CRISPR de Activación (h) G3BP1: sc-400745-ACT

La G3BP1 humana (factor 1 de ensamblaje de gránulos de estrés G3BP) es una proteína de unión a ARN que nuclea la formación de gránulos de estrés y coordina la clasificación del ARNm durante el estrés celular. Integra señales procedentes del control de la traducción y de las vías de inmunidad innata al regular la estabilidad del ARNm, el inicio de la traducción y la remodelación de ribonucleoproteínas, con efectos posteriores sobre la apoptosis, las respuestas antivirales y los programas del ciclo celular. G3BP1 participa en procesos adaptativos al estrés vinculados a la detención de la traducción mediada por eIF2α, la señalización MAPK y el metabolismo del ARN, y su desregulación se ha asociado con una tolerancia al estrés alterada y una proliferación aberrante en múltiples contextos patológicos. Debido a que G3BP1 acopla el procesamiento del ARN con la señalización sensible al estrés, se estudia ampliamente en modelos de biología tumoral, neurodegeneración e interacciones huésped–patógeno.

G3BP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de G3BP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

G3BP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus G3BP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional G3BP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de G3BP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo G3BP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de G3BP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía G3BP1 en células tumorales con expresión de G3BP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.