Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO G2A (h): sc-401866
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- G2A Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique G2A, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: G2A Antibody (G-5): sc-137112
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO G2A (h) | sc-401866 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
GPR132 code pour le récepteur couplé aux protéines G (RCPG) G2A, un capteur immunorégulateur impliqué dans le trafic des leucocytes et les réponses aux signaux inflammatoires. G2A peut être activé par l’acidification extracellulaire et par des lipides bioactifs tels que des dérivés oxydés d’acides gras, reliant le stress tissulaire à la signalisation des RCPG via des protéines G hétérotrimériques et des voies en aval de type MAPK et dépendantes du calcium. Dans les cellules immunitaires, la signalisation de G2A influence la chimiotaxie, l’état d’activation et des programmes associés aux cytokines qui façonnent les microenvironnements inflammatoires. Une expression ou une signalisation dérégulée de GPR132 a été associée à l’inflammation chronique et aux interactions tumeur–système immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en immunologie et en biologie du cancer.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO G2A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPR132 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GPR132, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GPR132 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine G2A.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GPR132 pour l'étude de la signalisation de G2A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de GPR132 essentiels à la fonction de G2A
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GPR132 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le G2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le G2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GPR132. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le G2A plasmide HDR (h) et le G2A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GPR132 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GPR132 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.