Plásmido CRISPR de Activación (h) G0S2: sc-402335-ACT

Human G0S2 (interruptor G0/G1 2) codifica una pequeña proteína reguladora implicada en la coordinación del metabolismo lipídico y la quiescencia celular. G0S2 interactúa con enzimas metabólicas clave para modular la lipólisis y se ha relacionado con la función mitocondrial, las respuestas al estrés oxidativo y programas transcripcionales que configuran la homeostasis energética. Su expresión se regula de forma dinámica durante la diferenciación y la señalización inflamatoria, lo que vincula a G0S2 con la biología de los adipocitos, las transiciones de estado de las células inmunitarias y una adaptación metabólica más amplia. Se ha informado de una expresión desregulada de G0S2 en múltiples contextos patológicos, lo que respalda su uso como una herramienta molecular para estudiar alteraciones a nivel de vías más que resultados clínicos directos.

G0S2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de G0S2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

G0S2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus G0S2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional G0S2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de G0S2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo G0S2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de G0S2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía G0S2 en células tumorales con expresión de G0S2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.