Plásmido CRISPR de Activación (m) G-CSF: sc-419844-ACT

El gen murino **Csf3** codifica el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), una citocina secretada que controla la granulopoyesis al promover la proliferación, la diferenciación y la supervivencia de los progenitores de neutrófilos, y al movilizar granulocitos maduros desde la médula ósea. G-CSF señaliza principalmente a través de **CSF3R** para activar las vías **JAK/STAT**, **MAPK/ERK** y **PI3K/AKT**, coordinando la homeostasis de la inmunidad innata y las respuestas inflamatorias. La actividad alterada del eje **Csf3/G-CSF** se estudia con frecuencia en modelos de infección e inflamación estéril, así como en contextos de expansión mieloide y lesión tisular impulsada por neutrófilos. En biología tumoral e inmunología, G-CSF también se utiliza para investigar cómo la mielopoyesis inducida por citocinas configura el compartimento mieloide dentro de microambientes inflamatorios.

G-CSF El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Csf3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

G-CSF El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Csf3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Csf3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de G-CSF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Csf3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de G-CSF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía G-CSF en células tumorales con expresión de Csf3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.