Plasmide CRISPR d'Activation (m) G-CSF: sc-419844-ACT

Le gène murin Csf3 code le facteur de stimulation des colonies de granulocytes (G-CSF), une cytokine sécrétée qui contrôle la granulopoïèse en favorisant la prolifération, la différenciation et la survie des progéniteurs neutrophiles, ainsi qu’en mobilisant les granulocytes matures de la moelle osseuse. Le G-CSF transmet ses signaux principalement via CSF3R, activant les voies JAK/STAT, MAPK/ERK et PI3K/AKT, et coordonnant ainsi l’homéostasie de l’immunité innée et les réponses inflammatoires. Une activité altérée de l’axe Csf3/G-CSF est couramment étudiée dans des modèles d’infection et d’inflammation stérile, ainsi que dans des contextes d’expansion myéloïde et de lésions tissulaires médiées par les neutrophiles. En biologie tumorale et en immunologie, le G-CSF est également utilisé pour explorer comment une myélopoïèse induite par les cytokines façonne le compartiment myéloïde au sein de microenvironnements inflammatoires.

G-CSF Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Csf3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

G-CSF Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Csf3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Csf3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de G-CSF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Csf3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de G-CSF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie G-CSF dans les cellules tumorales présentant une expression de Csf3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.