Plásmido CRISPR de Activación (m2) Fyn: sc-420431-ACT-2

El gen Fyn del ratón codifica una tirosina quinasa no receptora de la familia Src que actúa como un centro proximal de señalización aguas abajo de receptores inmunitarios, integrinas y receptores de factores de crecimiento, regulando, de manera dependiente de la fosforilación, el control de la dinámica del citoesqueleto, la adhesión celular, la migración y la proliferación. En las células T y otros linajes hematopoyéticos, Fyn contribuye a la señalización del TCR y a la activación inmunitaria mediante vías que incluyen MAPK/ERK, PI3K–AKT y la modulación de complejos de fosfatasas y adaptadores, mientras que en el sistema nervioso influye en la señalización sináptica y en procesos relacionados con la mielinización. La actividad desregulada de Fyn se ha asociado, en sistemas modelo, con respuestas inflamatorias alteradas, señalización vinculada a la neurodegeneración y redes de señalización oncogénica, lo que la hace relevante para estudios de regulación inmunitaria, función neuronal y biología tumoral. La edición génica de Fyn en ratón facilita la disección mecanística de vías dependientes de quinasas, redes de fosforilación y fenotipos específicos de tipo celular in vitro e in vivo.

Fyn El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Fyn sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fyn El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Fyn en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Fyn, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fyn. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Fyn y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fyn en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fyn en células tumorales con expresión de Fyn silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.