Partículas Lentivirales de Activación (h) FUS/TLS: sc-400612-LAC

FUS (FUS/TLS) codifica una proteína de unión a ARN/ADN que acopla la regulación de la transcripción con el empalme (splicing) del pre-ARNm, el transporte de ARNm y la dinámica de los gránulos de estrés. FUS participa en el mantenimiento del genoma al coordinar la respuesta al daño del ADN y su reparación, incluidas vías vinculadas a la señalización de roturas de doble cadena, e influye en programas transcripcionales asociados a la ARN polimerasa II. A través de sus dominios de baja complejidad, FUS puede experimentar separación de fases, lo que configura ensamblajes ribonucleoproteicos y afecta la proteostasis neuronal. La desregulación o las mutaciones en FUS se asocian fuertemente con la biología de enfermedades neurodegenerativas, en particular la esclerosis lateral amiotrófica y la demencia frontotemporal, y también se estudian en contextos de inestabilidad genómica y oncogenes de fusión asociados a sarcomas.

Las partículas de activación lentiviral FUS/TLS (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de FUS en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FUS/TLS (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción FUS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FUS/TLS. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo FUS y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.