Plásmido Doble Nickase (m) FUS/TLS: sc-433326-NIC

Fus codifica la proteína de unión a ARN FUS/TLS, un factor predominantemente nuclear que coordina múltiples etapas de la expresión génica, incluida la regulación transcripcional, el empalme (splicing) del pre-ARNm, el transporte de ARNm y la dinámica de los gránulos de estrés. FUS/TLS participa en las respuestas al daño del ADN y en el mantenimiento del genoma mediante interacciones con la maquinaria de reparación y complejos asociados a la cromatina, vinculando el procesamiento de ARN con la homeostasis celular. La alteración de la función de FUS/TLS modifica el metabolismo del ARN neuronal y la proteostasis, y su localización aberrante o su agregación se ha implicado ampliamente en la neurodegeneración, lo que convierte a Fus en un objetivo clave para estudios mecanísticos de la biología del ARN en el sistema nervioso. En modelos murinos, la perturbación de Fus proporciona un sistema manejable para analizar redes de regulación del ARN y vías relacionadas con la reparación del ADN, las respuestas al estrés y fenotipos neurodegenerativos.

FUS/TLS El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Fus en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Fus. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Fus. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Fus alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.