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Partículas Lentivirales de Activación (h) FUNDC1 | sc-403031-LAC | 200 µl | $455.00 |
FUNDC1 (FUN14 domain containing 1) codifica un receptor de la membrana externa mitocondrial que media la mitofagia sensible a la hipoxia al unirse a LC3 mediante su motivo LIR y coordinar la eliminación selectiva de mitocondrias dañadas. La actividad de FUNDC1 está regulada por señales dependientes de fosforilación e interactúa con vías que controlan la dinámica mitocondrial, la bioenergética y la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno. Por su papel en el control de calidad mitocondrial, FUNDC1 se ha estudiado en el contexto de la adaptación al estrés celular y de la señalización inflamatoria, con asociaciones descritas con disfunción cardiometabólica, procesos neurodegenerativos y la reprogramación metabólica vinculada al cáncer. Modificar la expresión de FUNDC1 ofrece un enfoque manejable para explorar cómo la mitofagia y el recambio mitocondrial remodelan las decisiones de destino celular bajo hipoxia y otros estresores.
Las partículas de activación lentiviral FUNDC1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de FUNDC1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.
Las partículas de activación lentiviral FUNDC1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción FUNDC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FUNDC1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo FUNDC1 y la arquitectura reguladora.
El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.