FucT-IV Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401795

Descripción general

FUT4 codifica la α1,3-fucosiltransferasa FucT-IV residente en el aparato de Golgi, una enzima que transfiere fucosa a aceptores de N-acetil-lactosamina para generar epítopos de glicanos fucosilados, como estructuras tipo Lewis X, en glicoproteínas y glicolípidos. Al modular la glicosilación de la superficie celular, FucT-IV influye en la adhesión mediada por selectinas, el tráfico de leucocitos y, de forma más amplia, en la señalización dependiente de glicanos y en la dinámica de receptores. La actividad de FUT4 se integra con el metabolismo de la fucosa y con vías de glicosilación que regulan las interacciones de células inmunitarias, las respuestas inflamatorias y la migración celular. En la literatura, la expresión desregulada de FUT4 y los patrones alterados de fucosilación se han asociado con la invasividad de células tumorales, fenotipos de adhesión relacionados con la metástasis y cambios en las interacciones con el microambiente inmunitario, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la biología mediada por glicanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FucT-IV (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FUT4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FUT4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FUT4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FucT-IV.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FUT4 para la investigación de la señalización de FucT-IV, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FUT4 críticos para la función de FucT-IV
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FUT4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FucT-IV CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FucT-IV CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FUT4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FucT-IV (h) y el plásmido HDR FucT-IV (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FUT4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FUT4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.