Plásmido CRISPR de Activación (h) Fucokinase: sc-409449-ACT

El gen humano **FUK** codifica la fucocinasa, una cinasa citosólica que fosforila la **L-fucosa** a **fucosa-1-fosfato**, iniciando la vía de rescate de la L-fucosa que repone **GDP-fucosa** para las reacciones de fucosilación. Al mantener la homeostasis de los azúcares nucleótido, la fucocinasa contribuye a procesos de glicosilación vinculados al Golgi y al retículo endoplásmico (RE) que regulan el plegamiento de proteínas, la señalización de receptores y las interacciones célula–célula. Las alteraciones del metabolismo de la fucosa y la fucosilación desregulada se han asociado con cambios en la modulación inmunitaria, la inflamación y firmas de glicanos asociadas a tumores, lo que convierte a **FUK** en un punto de interés para estudiar el control glicometabólico de los fenotipos celulares. La modulación experimental de la expresión de **FUK** puede ayudar a dilucidar cómo la GDP-fucosa derivada de la vía de rescate influye en la remodelación de glicoproteínas y glicolípidos en contextos de estrés y diferenciación.

Fucokinase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FUK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fucokinase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FUK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FUK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fucokinase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FUK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fucokinase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fucokinase en células tumorales con expresión de FUK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.