FUCA2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405221

Descripción general

FUCA2 codifica la alfa-L-fucosidasa 2, una glicosidasa secretada de tipo lisosomal que hidroliza residuos terminales de fucosa de glicoconjugados N- y O-enlazados y de glicolípidos, contribuyendo al catabolismo y al remodelado de los glicanos. Al modular el estado de fucosilación de proteínas de la superficie celular y de la matriz extracelular, FUCA2 puede influir en procesos como el recambio de receptores, la adhesión célula–célula y la señalización de glicanos asociada al sistema inmunitario. Las alteraciones del metabolismo de la fucosa y de la actividad fucosidasa se han relacionado con cambios en las respuestas inflamatorias y en patrones de glicosilación asociados a tumores, lo que convierte a FUCA2 en un nodo útil para investigar fenotipos impulsados por la glicómica. Los estudios funcionales suelen centrarse en cómo la desfucosilación dependiente de FUCA2 afecta al tráfico intracelular, la función lisosomal y las vías de señalización mediadas por glicoproteínas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FUCA2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FUCA2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FUCA2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FUCA2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FUCA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FUCA2 para la investigación de la señalización de FUCA2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FUCA2 críticos para la función de FUCA2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FUCA2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FUCA2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FUCA2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FUCA2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FUCA2 (h) y el plásmido HDR FUCA2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FUCA2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FUCA2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.