Plásmido Doble Nickase (h) FTα: sc-403920-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)FTα consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FTα (h) y el plásmido de doble nickasa FTα (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FNTA. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FTα Anticuerpo (D-5): sc-374262
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) FTα | sc-403920-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) FTα | sc-403920-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FNTA codifica la subunidad alfa de la farnesiltransferasa (FTα), que forma un heterodímero obligatorio con la subunidad beta para catalizar la farnesilación de proteínas, una modificación lipídica isoprenoide C15 en motivos CAAX del extremo C-terminal. Este procesamiento postraduccional favorece la asociación a membranas y el tráfico subcelular de diversas proteínas de señalización, incluidos miembros de la superfamilia RAS, influyendo así en la señalización MAPK, la organización del citoesqueleto, la dinámica vesicular y la progresión del ciclo celular. La actividad de FTα conecta la vía de biosíntesis del mevalonato/isoprenoides con la proteostasis y la transducción de señales al permitir la localización estable y la función de los sustratos prenilados. La prenilación desregulada y el procesamiento alterado dependiente de FNTA se han asociado con señalización de crecimiento aberrante y vías oncogénicas, lo que convierte a FNTA en un objetivo útil para estudiar el comportamiento de redes dependientes de la prenilación en células humanas.
FTα El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FNTA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FNTA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FNTA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FNTA alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.