Plasmide CRISPR/Cas9 KO FSD1 (h): sc-406328

Présentation

FSD1 (fibronectin type III and SPRY domain containing 1) code une protéine cytosolique contenant des domaines SPRY et de type fibronectine III, ce qui suggère un rôle dans les interactions protéine–protéine et la régulation de complexes de signalisation. Des liens fonctionnels rapportés situent FSD1 dans le contrôle de l’organisation du cytosquelette et de processus associés aux microtubules, avec des impacts potentiels sur l’architecture cellulaire, le trafic intracellulaire et les réponses au stress. L’expression et des altérations génomiques impliquant FSD1 ont été relevées dans des jeux de données sur le cancer, ce qui en fait un gène candidat pertinent pour étudier des mécanismes influençant la prolifération, la migration et la fitness cellulaire. En tant que facteur encore relativement peu caractérisé, FSD1 est également pertinent pour des études de découverte de voies reliant des protéines d’échafaudage médiées par des domaines à des sorties de signalisation en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FSD1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FSD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FSD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FSD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FSD1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FSD1 pour l'étude de la signalisation de FSD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FSD1 essentiels à la fonction de FSD1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FSD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FSD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FSD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FSD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FSD1 plasmide HDR (h) et le FSD1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FSD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FSD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.