FRP-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422899

Descripción general

Sfrp4 codifica la proteína 4 relacionada con frizzled secretada (FRP-4), un modulador soluble de la señalización Wnt que se une a ligandos Wnt y/o a receptores Frizzled para ajustar la salida de las vías dependientes de β-catenina y de las vías no canónicas. En tejidos de ratón, FRP-4 contribuye a la regulación de decisiones sobre el destino celular, la proliferación, la remodelación de la matriz extracelular y programas de diferenciación importantes para el patrón del desarrollo y la homeostasis tisular. La expresión alterada de Sfrp4 se ha asociado con una actividad desregulada de la vía Wnt en contextos como la fibrosis, la remodelación metabólica de tejidos y la biología tumoral, donde los cambios en el “tono” de Wnt pueden afectar las interacciones epitelio-mesenquimales y las respuestas del estroma. Como regulador secretado de la vía, Sfrp4 se estudia con frecuencia en redes de intercomunicación de señalización que integran Wnt con TGF-β, señales inflamatorias y programas transcripcionales que especifican linajes celulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FRP-4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sfrp4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sfrp4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sfrp4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FRP-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sfrp4 para la investigación de la señalización de FRP-4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sfrp4 críticos para la función de FRP-4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sfrp4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FRP-4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FRP-4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sfrp4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FRP-4 (m) y el plásmido HDR FRP-4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sfrp4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sfrp4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.