FRP-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422897

Descripción general

Sfrp1 codifica la proteína 1 relacionada con Frizzled y secretada (FRP-1), un modulador secretado de la señalización Wnt que se une a ligandos Wnt y a receptores Frizzled para definir la amplitud de la vía y los gradientes espaciales. Al ajustar la transcripción canónica dependiente de β-catenina y las salidas no canónicas de Wnt, FRP-1 influye en la proliferación, diferenciación y migración celular, así como en la remodelación de la matriz extracelular durante el desarrollo y la homeostasis tisular. En modelos murinos y estudios mecanísticos, la alteración de la actividad de Sfrp1 se ha vinculado con estados desregulados de la vía Wnt relevantes para la fibrosis, fenotipos metabólicos y esqueléticos, y contextos de señalización asociados a tumores. Dado que Sfrp1 actúa en la interfaz extracelular, se utiliza con frecuencia para analizar el control autocrino frente al paracrino de programas impulsados por Wnt.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FRP-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sfrp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sfrp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sfrp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FRP-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sfrp1 para la investigación de la señalización de FRP-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sfrp1 críticos para la función de FRP-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sfrp1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FRP-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FRP-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sfrp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FRP-1 (m) y el plásmido HDR FRP-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sfrp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sfrp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.