Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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fractalkine Double Nickase Plasmid (h): sc-402339-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das fractalkine Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- fractalkine Double-Nickase-Plasmid (h) und fractalkine Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CX3CL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: fractalkine: sc-166200
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
fractalkine Double Nickase Plasmid (h) | sc-402339-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
fractalkine Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402339-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CX3CL1 kodiert Fraktalkin, ein atypisches Chemokin, das sowohl als membranverankertes Adhäsionsmolekül als auch – nach proteolytischem Shedding – als löslicher Chemoattraktant vorliegt. Durch die Bindung an CX3CR1 auf Monozyten, NK-Zellen und bestimmten T‑Zell-Subtypen reguliert Fraktalkin das Anhalten (Arrest), die Migration und die Immunüberwachung von Leukozyten in vaskulären und neuronalen Geweben. Die CX3CL1–CX3CR1-Signalgebung greift in Entzündungswege wie NF‑κB und MAPK ein und moduliert die Endothelaktivierung, Mikroglia-Antworten sowie die Neuron‑Glia-Kommunikation. Eine Fehlregulation dieser Achse wird mit chronischer Entzündung und der Infiltration von Immunzellen in Verbindung gebracht, wie sie in kardiovaskulären, neuroinflammatorischen und tumorassoziierten Mikroumgebungen beobachtet wird.
fractalkine Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CX3CL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CX3CL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CX3CL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CX3CL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.