Plasmide CRISPR d'Activation (h) Fra1: sc-400527-ACT

FOSL1 code la sous-unité Fra1 du facteur de transcription AP-1, une protéine à fermeture éclair de leucines qui forme des hétérodimères avec des membres de la famille JUN afin de réguler l’expression de gènes répondant aux stimuli. L’activité de Fra1 se situe en aval de la signalisation MAPK/ERK et intègre des signaux issus des voies des facteurs de croissance, des cytokines et du stress pour contrôler des programmes liés à la prolifération, à la différenciation, au remodelage de la matrice extracellulaire et à la transition épithélio-mésenchymateuse. Une expression dérégulée de FOSL1 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et états inflammatoires, où elle peut remodeler des réseaux transcriptionnels gouvernant l’invasion, la plasticité de lignée et les interactions avec le microenvironnement. En tant que régulateur nucléaire, Fra1 constitue un nœud utile pour disséquer l’utilisation d’enhancers dépendante d’AP-1 et les circuits transcriptionnels spécifiques au contexte dans les cellules humaines.

Fra1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOSL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Fra1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOSL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOSL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Fra1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOSL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Fra1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Fra1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOSL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.