FPR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420405

Übersicht

Der Formylpeptidrezeptor 2 (FPR2; Gen *Fpr2*) ist ein G‑Protein‑gekoppelter Rezeptor der Maus, der unterschiedliche chemoattraktive und pro-resolvierende Liganden erkennt und über Gi-Signalisierung die Chemotaxis, Adhäsion und Aktivierung von Leukozyten reguliert. Die Aktivierung von FPR2 moduliert nachgeschaltete Signalwege wie PI3K/AKT, MAPK/ERK, die durch PLCβ vermittelte Calcium-Mobilisierung sowie β‑Arrestin‑assoziierte Signale und beeinflusst dadurch die Freisetzung inflammatorischer Mediatoren und Reaktionen mit reaktiven Sauerstoffspezies. Über diese Programme trägt FPR2 zur angeborenen Immunüberwachung und zur Auflösung von Entzündungen bei; seine Relevanz ist für entzündliche Gewebeschädigungen, infektionsassoziierte Entzündungen und immunvermittelte Pathologien dokumentiert. Seine kontextabhängige Signalgebung macht ihn zu einem nützlichen Ziel, um zu untersuchen, wie GPCR-Signale das Verhalten myeloischer Zellen in unterschiedlichen entzündlichen Mikroumgebungen umprogrammieren.

Das FPR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fpr2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fpr2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fpr2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FPR2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fpr2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FPR2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fpr2-Exone abzielen, die für die FPR2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fpr2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FPR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FPR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fpr2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FPR2 HDR-Plasmid (m) und FPR2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fpr2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fpr2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.