FOXP3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422896

Descripción general

Foxp3 codifica FOXP3, un factor de transcripción tipo forkhead/hélice alada que actúa como regulador maestro del compromiso de linaje de las células T reguladoras (Treg) y de su función supresora en el ratón. FOXP3 orquesta programas transcripcionales que controlan la tolerancia inmunitaria, la homeostasis de citocinas y los umbrales de activación de las células T mediante interacciones con factores como NFAT, RUNX1 y complejos modificadores de la cromatina. En los tejidos inmunitarios, las redes dependientes de FOXP3 moldean la tolerancia periférica, limitan las respuestas inflamatorias e influyen en la comunicación entre las células T y las células presentadoras de antígeno. La desregulación de la expresión de Foxp3 o de la actividad de FOXP3 se utiliza ampliamente como punto de entrada mecanístico para estudiar fallos en la regulación inmunitaria relevantes para modelos de autoinmunidad, alergia y enfermedades inflamatorias.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FOXP3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Foxp3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Foxp3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Foxp3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FOXP3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Foxp3 para la investigación de la señalización de FOXP3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Foxp3 críticos para la función de FOXP3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Foxp3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FOXP3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FOXP3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Foxp3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FOXP3 (m) y el plásmido HDR FOXP3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Foxp3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Foxp3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.