Plásmido CRISPR de Activación (m) FOXP3: sc-422896-ACT

El gen Foxp3 de ratón codifica FOXP3, un factor de transcripción tipo forkhead/hélice-alada que actúa como regulador definitorio de linaje de las células T reguladoras (Treg) y como controlador central de la tolerancia inmunitaria. FOXP3 coordina programas transcripcionales que gobiernan los umbrales de señalización del receptor de células T, la supresión de la vía de IL‑2 y el control dependiente de la cromatina de las redes génicas de citocinas, moldeando así la homeostasis inmunitaria periférica. La alteración o la expresión desregulada de FOXP3 perturba la diferenciación de las Treg y su función supresora, vinculando este eje con fenotipos inflamatorios y similares a los autoinmunes, así como con respuestas alteradas en modelos de enfermedad mediada por el sistema inmunitario. La actividad de FOXP3 también se estudia en el contexto de la plasticidad de las células inmunitarias, la inflamación tisular y las interacciones tumor‑inmunidad, donde los programas de las Treg influyen en los microambientes inmunitarios locales.

FOXP3 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Foxp3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FOXP3 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Foxp3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Foxp3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FOXP3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Foxp3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FOXP3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FOXP3 en células tumorales con expresión de Foxp3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.