Plásmido Doble Nickase (h) FOXJ1: sc-402226-NIC

FOXJ1 (forkhead box J1) codifica un factor de transcripción de la familia forkhead que actúa como regulador maestro de la ciliogénesis de cilios móviles, coordinando el acoplamiento de los cuerpos basales, el ensamblaje del axonema y la diferenciación de las células epiteliales multiciliadas. Controla programas transcripcionales necesarios para el batido ciliar y el aclaramiento mucociliar, vinculando la polaridad epitelial y la organización del citoesqueleto con la señalización dependiente de cilios y el flujo de fluidos. La actividad de FOXJ1 es central en los linajes de las vías respiratorias y del epéndimo, donde una regulación precisa sostiene la homeostasis tisular y el patrón de desarrollo. La expresión desregulada de FOXJ1 o una ciliogénesis dirigida por FOXJ1 deficiente se asocia con fenotipos humanos relacionados con ciliopatías, incluidos defectos en la función mucociliar y anomalías ependimarias relevantes para la hidrocefalia.

FOXJ1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FOXJ1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FOXJ1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FOXJ1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FOXJ1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.