Plásmido Doble Nickase (h) FOXE3: sc-404466-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)FOXE3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FOXE3 (h) y el plásmido de doble nickasa FOXE3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FOXE3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FOXE3 Anticuerpo (G-1): sc-393526
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) FOXE3 | sc-404466-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) FOXE3 | sc-404466-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXE3 codifica un factor de transcripción de la familia *forkhead box* que es esencial para el desarrollo del segmento anterior y del cristalino, donde regula programas de expresión génica que controlan la proliferación, la diferenciación y el mantenimiento de la identidad de las células epiteliales del cristalino. A través de su unión al ADN mediante su dominio *forkhead*, FOXE3 influye en redes transcripcionales del desarrollo y en procesos ligados al ciclo celular que modelan la morfogénesis ocular y preservan la transparencia del tejido. La desregulación o la pérdida de función de FOXE3 se asocia con trastornos oculares congénitos, incluidos la disgenesia del segmento anterior y fenotipos de catarata, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudiar el desarrollo ocular humano y los mecanismos de enfermedad. Por ello, FOXE3 se utiliza ampliamente como marcador y regulador en modelos de biología del cristalino, control transcripcional y genética del desarrollo.
FOXE3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FOXE3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FOXE3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FOXE3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FOXE3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.