Fnk Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419717

Descripción general

El gen murino Plk3 codifica la quinasa de serina/treonina Fnk, un miembro de la familia de quinasas tipo Polo implicado en la señalización sensible al estrés y en el control del ciclo celular. Fnk participa en la regulación de puntos de control y modula vías vinculadas a las respuestas al daño del ADN, la apoptosis y la proliferación a través de redes de señalización dependientes de fosforilación. La actividad alterada de PLK3/Fnk se ha asociado con una progresión mitótica desregulada y con fenotipos de inestabilidad genómica relevantes para la biología del cáncer y la homeostasis tisular. Estas propiedades hacen de Plk3 una diana útil para investigar la señalización regulada por quinasas, la adaptación al estrés y las decisiones de destino celular en sistemas modelo de mamíferos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Fnk (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Plk3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Plk3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Plk3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Fnk.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Plk3 para la investigación de la señalización de Fnk, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Plk3 críticos para la función de Fnk
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Plk3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Fnk CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Fnk CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Plk3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Fnk (m) y el plásmido HDR Fnk (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Plk3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Plk3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.