Plásmido CRISPR de Activación (h) FNBP4: sc-408501-ACT

FNBP4 (proteína 4 de unión a formina) es un adaptador citoplasmático implicado en el acoplamiento de la dinámica de membrana con la remodelación del citoesqueleto de actina mediante interacciones con socios ricos en prolina y que contienen dominios SH3. Al conectar complejos de señalización con la maquinaria endocítica y del citoesqueleto, FNBP4 puede influir en el tráfico vesicular, los cambios en la forma celular y los programas de migración. La alteración en la regulación de estos procesos se asocia con frecuencia a fenotipos de crecimiento e invasión desregulados, lo que convierte a FNBP4 en un nodo relevante para estudiar el reordenamiento de vías en el cáncer y otros trastornos que implican un control aberrante del citoesqueleto. La investigación funcional de FNBP4 respalda estudios mecanísticos de la señalización dependiente de actina, el tráfico de membranas y las salidas transcripcionales específicas del contexto impulsadas por estas vías.

FNBP4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FNBP4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FNBP4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FNBP4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FNBP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FNBP4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FNBP4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FNBP4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FNBP4 en células tumorales con expresión de FNBP4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.