Plásmido Doble Nickase (h) FN3K: sc-412985-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)FN3K consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FN3K (h) y el plásmido de doble nickasa FN3K (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FN3K. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FN3K Anticuerpo (E-9): sc-271503
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) FN3K | sc-412985-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) FN3K | sc-412985-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El FN3K humano codifica la fructosamina-3-quinasa, una enzima citosólica de desglicación que fosforila los productos de Amadori en proteínas glicadas para promover su desestabilización y eliminación, ayudando a mantener la proteostasis bajo estrés por carbonilos y glicación. La actividad de FN3K se intersecta con el manejo de metabolitos reactivos derivados de la glucosa, las respuestas al estrés oxidativo y las vías de control de calidad proteica que influyen en el envejecimiento celular y el equilibrio redox. La alteración de la expresión o la actividad de FN3K se ha asociado con variabilidad en la carga de glicación proteica y se ha explorado en el contexto de la desregulación metabólica y fenotipos moleculares relacionados con la diabetes. En la investigación biomédica, FN3K se estudia por su impacto en el recambio de proteínas glicadas, las perturbaciones de señalización causadas por la glicación no enzimática y los efectos posteriores sobre la viabilidad celular y la adaptación al estrés.
FN3K El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FN3K en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FN3K. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FN3K. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FN3K alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.