Plásmido CRISPR de Activación (h) FN3K: sc-412985-ACT

El gen humano **FN3K** codifica la fructosamina-3-quinasa, una enzima citosólica que fosforila la fructosilisina y otras cetoaminas relacionadas en proteínas glicadas, favoreciendo su desestabilización y la posterior desglucación. Al limitar la acumulación de productos finales de glicación avanzada y la disfunción proteica mediada por glicación, FN3K contribuye a la proteostasis y a la homeostasis metabólica sensible al estado redox en contextos de aumento del flujo de glucosa. La actividad de FN3K se vincula con el metabolismo de los carbohidratos y con las respuestas celulares al estrés al modular la carga de glicación no enzimática de las proteínas. La alteración de la expresión o la función de FN3K se ha estudiado en relación con la desregulación metabólica y las complicaciones asociadas a la hiperglucemia crónica, así como con efectos más amplios sobre el control de calidad de las proteínas.

FN3K El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FN3K sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FN3K El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FN3K en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FN3K, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FN3K. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FN3K y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FN3K en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FN3K en células tumorales con expresión de FN3K silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.