FMR2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420393

Descripción general

Aff2 codifica FMR2 (también conocido como miembro 2 de la familia AF4/FMR2), una proteína nuclear implicada en la regulación de la transcripción y el metabolismo del ARN en el sistema nervioso. FMR2 contiene dominios funcionales asociados al control génico ligado a la cromatina y se ha relacionado con programas de expresión génica dependientes de la actividad que moldean la diferenciación neuronal y la plasticidad sináptica. La alteración de la función de AFF2/FMR2 se asocia con discapacidad intelectual ligada al cromosoma X y con fenotipos del neurodesarrollo, lo que la convierte en una diana relevante para estudiar los mecanismos de regulación génica subyacentes a la cognición y el comportamiento. En modelos murinos, la perturbación de Aff2 permite investigar cómo el control transcripcional se integra con la maduración neuronal, la función de los circuitos y las vías posteriores que influyen en el aprendizaje y la memoria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FMR2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aff2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aff2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aff2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FMR2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aff2 para la investigación de la señalización de FMR2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aff2 críticos para la función de FMR2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aff2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FMR2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FMR2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aff2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FMR2 (m) y el plásmido HDR FMR2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aff2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aff2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.