Plasmide CRISPR d'Activation (h) Flt-3/Flk-2: sc-400218-ACT

FLT3 (Flt-3/Flk-2) code une tyrosine kinase réceptrice de classe III, exprimée principalement dans les progéniteurs hématopoïétiques, où la liaison du ligand FLT3 favorise la prolifération, la survie et la différenciation. L’activation du récepteur déclenche en aval les voies de signalisation PI3K–AKT, RAS–MAPK et JAK–STAT, intégrant des signaux qui régulent le développement myéloïde et lymphoïde. Une signalisation FLT3 dérégulée, incluant des mutations activatrices et une expression aberrante, est fréquemment étudiée dans le contexte de la leucémogenèse et d’une altération du destin des cellules hématopoïétiques. Par conséquent, FLT3 constitue une cible moléculaire largement utilisée pour analyser la signalisation des récepteurs aux facteurs de croissance, la biologie des progéniteurs et le remodelage des réseaux induit par des kinases oncogéniques dans des modèles cellulaires humains.

Flt-3/Flk-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FLT3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Flt-3/Flk-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FLT3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FLT3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Flt-3/Flk-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FLT3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Flt-3/Flk-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Flt-3/Flk-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de FLT3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.