Flt-1/VEGFR1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400330-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Flt-1/VEGFR1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Flt-1/VEGFR1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Flt-1/VEGFR1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FLT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Flt-1/VEGFR1: sc-271789
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Flt-1/VEGFR1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400330-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Flt-1/VEGFR1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400330-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FLT1 kodiert Flt-1/VEGFR1, eine hochaffine Rezeptor-Tyrosinkinase für VEGF-A, VEGF-B und den plazentaren Wachstumsfaktor (PlGF), die die endotheliale Signalübertragung und die vaskuläre Homöostase moduliert. Nach Ligandenbindung ist VEGFR1 an der Signalübertragung im VEGF-Signalweg beteiligt, mit nachgeschalteten Effekten auf MAPK/ERK-, PI3K/AKT-, PLCγ- und SRC-Familien-Kaskaden, wodurch endotheliale Migration, Überleben und Permeabilität beeinflusst werden. Alternatives Spleißen erzeugt lösliches VEGFR1 (sFlt-1), einen Köderrezeptor, der VEGF-Liganden abfängt und das angiogene Gleichgewicht feinjustiert. Eine Fehlregulation der FLT1/VEGFR1-Aktivität wird mit abweichender Angiogenese und vaskulärem Remodeling in Verbindung gebracht, wie sie in der Krebsbiologie, bei retinalen Neovaskularisationserkrankungen, in ischämieassoziierten Pathologien und in entzündlichen Mikroumgebungen beobachtet werden.
Flt-1/VEGFR1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FLT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FLT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FLT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FLT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.