Plasmide CRISPR/Cas9 KO FLRT3 (h): sc-406632

Présentation

FLRT3 (fibronectin leucine rich transmembrane protein 3) code une protéine transmembranaire à passage unique qui agit comme un signal d’adhérence et de guidage cellulaires au cours du développement, en coordonnant les interactions cellule–cellule et la croissance des neurites. FLRT3 participe à des réseaux de signalisation impliquant les voies des récepteurs du FGF et des ligands de guidage extracellulaires tels que les récepteurs UNC5, influençant l’adhérence, la répulsion et la mise en place des tissus. Par ces interactions, FLRT3 contribue à la régulation de la migration cellulaire, de la formation des synapses et de la morphogenèse dans de multiples contextes tissulaires. Des altérations de l’expression de FLRT3 et de la connectivité de ses voies ont été rapportées dans des études sur les processus neurodéveloppementaux et la biologie du cancer, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans la recherche sur l’adhérence et la migration.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FLRT3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FLRT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FLRT3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FLRT3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FLRT3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FLRT3 pour l'étude de la signalisation de FLRT3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FLRT3 essentiels à la fonction de FLRT3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FLRT3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FLRT3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FLRT3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FLRT3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FLRT3 plasmide HDR (h) et le FLRT3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FLRT3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FLRT3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.