Plásmido CRISPR de Activación (h) Flotillin-2: sc-401200-ACT

El gen humano **FLOT2** codifica la flotilina-2, una proteína de andamiaje asociada a la membrana, enriquecida en balsas lipídicas y microdominios similares a caveolas, que organiza complejos de receptores e influye en la curvatura de la membrana y en el tráfico endocítico. La flotilina-2 participa en la transducción de señales vinculada a receptores tirosina quinasas y a la actividad posterior de las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT, contribuyendo a la regulación de la adhesión celular, la migración y la dinámica del citoesqueleto. A través de su papel en la organización de microdominios de membrana y el transporte vesicular, **FLOT2** afecta la biología de los exosomas y el control espacial de nodos de señalización en la membrana plasmática. Se han descrito alteraciones en la expresión o la localización de la flotilina-2 en múltiples tipos de tumores y en otros contextos fisiopatológicos en los que la desregulación de la señalización y del tráfico de membrana contribuye a fenotipos asociados a enfermedad.

Flotillin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FLOT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Flotillin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FLOT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FLOT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Flotillin-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FLOT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Flotillin-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Flotillin-2 en células tumorales con expresión de FLOT2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.