Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Flotillin-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-420381-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Flotillin-1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Flotillin-1 Double-Nickase-Plasmid (m) und Flotillin-1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Flot1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Flotillin-1: sc-74566
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Flotillin-1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420381-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Flotillin-1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420381-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Flot1 kodiert Flotillin-1, ein mit Lipid-Rafts assoziiertes Gerüstprotein, das an der Plasmamembran sowie in endosomalen Kompartimenten angereichert ist und dort Membran-Mikrodomänen organisiert. Flotillin-1 ist an der clathrin-unabhängigen Endozytose, am vesikulären Transport und an der Signaltransduktion beteiligt, indem es die Clusterbildung von Rezeptoren und Zytoskelett-Interaktionen koordiniert und dadurch Signalwege wie EGFR/MAPK und PI3K/AKT beeinflusst. In Mauszellen trägt Flot1 zur Immun-Signalgebung, zur Membranorganisation in Neuronen und Gliazellen sowie zur Regulation von Zelladhäsion und -migration über raft-abhängige Proteinsortierung bei. Eine veränderte Menge oder Lokalisation von Flotillin-1 wurde mit fehlregulierter Membran-Trafficking- und Signalgebung in Verbindung gebracht, was für onkogene Prozesse, die Neurobiologie und Modelle entzündlicher Erkrankungen relevant ist.
Flotillin-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Flot1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Flot1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Flot1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Flot1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.