Flotillin-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420381

Descripción general

Flot1 codifica la flotilina-1, una proteína andamiaje conservada asociada a balsas lipídicas, enriquecida en la membrana plasmática y en compartimentos endosomales, donde ayuda a organizar microdominios para la transducción de señales. La flotilina-1 participa en la endocitosis independiente de clatrina, el tráfico de membranas y la remodelación del citoesqueleto, lo que influye en la internalización de receptores y en vías de señalización aguas abajo, incluidas las redes MAPK/ERK y de quinasas de la familia Src. En células de ratón, la flotilina-1 se ha vinculado a la regulación de la adhesión y la migración celular, la señalización de receptores inmunitarios y la función neuronal, a través de sus funciones en la organización de membranas y la dinámica vesicular. La desregulación de la biología de las flotilinas se ha asociado con fenotipos proliferativos y migratorios alterados y se ha estudiado en el contexto de la señalización relacionada con el cáncer, la neurodegeneración y los procesos inflamatorios, como un modulador mecanístico más que como un efector directo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Flotillin-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Flot1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Flot1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Flot1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Flotillin-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Flot1 para la investigación de la señalización de Flotillin-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Flot1 críticos para la función de Flotillin-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Flot1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Flotillin-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Flotillin-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Flot1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Flotillin-1 (m) y el plásmido HDR Flotillin-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Flot1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Flot1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.