Plásmido CRISPR de Activación (h) FLJ35220: sc-409086-ACT

ENDOV (FLJ35220) codifica una endorribonucleasa humana que se ha implicado en el metabolismo del ARN, con una preferencia descrita por sustratos de ARN que contienen inosina generados por la edición de ARN de A a I. Mediante el reconocimiento y la escisión de ARN editados o estructurados, ENDOV se sitúa en posición de influir en la estabilidad de los transcritos y en el control de calidad del ARN, interactuando con redes reguladoras postranscripcionales más amplias que moldean los programas de expresión génica. La desregulación del procesamiento del ARN y de las vías vinculadas a la edición se asocia con respuestas celulares alteradas al estrés y con la señalización inmunitaria, lo que convierte a ENDOV en un nodo relevante para estudios mecanísticos que conectan la vigilancia del ARN con cambios transcriptómicos asociados a enfermedad.

EndoV El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ENDOV sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EndoV El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ENDOV en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ENDOV, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EndoV. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ENDOV y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EndoV en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EndoV en células tumorales con expresión de ENDOV silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.