FLIP_S/L Lentiviral Activation Particles (h): sc-400400-LAC

CFLAR kodiert das zelluläre FLICE-inhibitorische Protein (FLIP S/L), ein katalytisch inaktives Caspase‑8‑Homolog, das die Signalübertragung von Todesrezeptoren moduliert, indem es die Assemblierung des DISC und die Aktivierung von Caspase‑8 kontrolliert. Über diese Wechselwirkungen stimmen FLIP‑Isoformen die extrinsische Apoptose fein ab, beeinflussen die Entscheidung zwischen Nekroptose und Apoptose und prägen die NF‑κB‑gekoppelte inflammatorische Signalgebung stromabwärts von TNFR1 sowie Fas-/TRAIL‑Rezeptoren. Eine veränderte CFLAR‑Expression ist häufig mit Phänotypen der Apoptoseresistenz und Immunflucht assoziiert und ist damit relevant für Studien zum Überleben von Tumorzellen, zu chronischen Entzündungen und zu Wirt‑Pathogen‑Interaktionen. CFLAR wird außerdem genutzt, um Mechanismen der zytokinvermittelten Überlebenssignale und das Crosstalk zwischen apoptotischen und angeborenen Immunwegen zu untersuchen.

FLIPS/L Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CFLAR-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

FLIPS/L Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CFLAR-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen FLIPS/L-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CFLAR-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.