FKSG80 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433960

Descripción general

Hcar1 codifica un receptor acoplado a proteína G sensible al lactato, implicado en vincular la disponibilidad extracelular de lactato con programas de señalización intracelular que regulan el metabolismo celular y la modulación inmunitaria en tejidos de ratón. La activación del receptor se asocia con una supresión de AMPc dependiente de Gi/o y con efectos posteriores sobre la señalización de MAPK, las respuestas transcripcionales y la reprogramación metabólica durante la hipoxia o un alto flujo glucolítico. Por su papel en la señalización del lactato, Hcar1 se estudia en contextos de inflamación, neurobiología, fisiología del tejido adiposo y del músculo, y microambientes asociados a tumores, donde los gradientes de lactato moldean el comportamiento celular. Por lo tanto, la señalización desregulada del receptor de lactato es relevante para vías que coordinan la homeostasis energética y la adaptación al estrés en múltiples sistemas orgánicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FKSG80 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hcar1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hcar1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hcar1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FKSG80.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hcar1 para la investigación de la señalización de FKSG80, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Hcar1 críticos para la función de FKSG80
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hcar1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FKSG80 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FKSG80 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hcar1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FKSG80 (m) y el plásmido HDR FKSG80 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hcar1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hcar1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.