FKHR/FOXO1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400137-ACT

FOXO1（FKHR）は、インスリン／IGF-1および増殖因子シグナルを統合し、細胞周期制御、アポトーシス、酸化ストレス応答、ならびに代謝恒常性を協調的に制御するフォークヘッドボックス型転写因子をコードします。FOXO1の活性は、PI3K–AKTシグナル伝達の下流における翻訳後修飾と細胞内局在によって調節され、さらにAMPKやストレス応答性経路からの入力も受けます。核内では、FOXO1が糖新生、オートファジー、分化に関与する転写プログラムを制御し、状況依存的な細胞運命決定を形作ります。FOXO1シグナルの破綻は、インスリン抵抗性や代謝性疾患、免疫細胞機能の変調、ならびに胞巣型横紋筋肉腫で認められるPAX3–FOXO1融合を含む発がん過程に関与するとされています。

FKHR/FOXO1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FOXO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FKHR/FOXO1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FOXO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFOXO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FKHR/FOXO1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFOXO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFKHR/FOXO1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFOXO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFKHR/FOXO1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。