Plásmido Doble Nickase (m) FKBP51: sc-420365-NIC

Fkbp5 codifica FKBP51, un cochaperón inmunofilina que se une a HSP90 y modula los complejos de receptores esteroideos, incluidos los receptores de glucocorticoides y progesterona, configurando así la sensibilidad del receptor y la regulación por retroalimentación. FKBP51 también interactúa con la señalización de respuesta al estrés al influir en la actividad de AKT/PHLPP y en programas inflamatorios relacionados con NF-κB, vinculando la proteostasis con el control transcripcional. En sistemas murinos, la alteración de la expresión de Fkbp5 se ha asociado con una señalización desregulada del eje hipotálamo–hipófisis–adrenal, la homeostasis metabólica y procesos neuroinmunes. Estas funciones convierten a FKBP51 en un nodo útil para desentrañar vías que acoplan la maquinaria de chaperonas a fenotipos endocrinos y de adaptación al estrés, tanto in vivo como en células cultivadas.

FKBP51 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Fkbp5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Fkbp5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Fkbp5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Fkbp5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.