FKBP11 Double Nickase Plasmid (h): sc-405563-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FKBP11 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FKBP11 Double-Nickase-Plasmid (h) und FKBP11 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FKBP11 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FKBP11: sc-398700
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FKBP11 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405563-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FKBP11 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405563-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FKBP11 kodiert ein im endoplasmatischen Retikulum lokalisiertes Mitglied der FK506-bindenden Protein-Familie mit Peptidyl‑Prolyl‑cis‑trans‑Isomerase-Aktivität, das die Proteinfaltung und Qualitätskontrolle im sekretorischen Weg unterstützt. Es ist in antikörpersezernierenden und anderen stark sekretorischen Zellzuständen angereichert, wo es zur ER‑Proteostase, zur Faltung neu entstehender Polypeptide und zur Koordination der Signalgebung der Unfolded Protein Response beiträgt. Über diese Funktionen ist FKBP11 mit der zellulären Anpassung an ER‑Stress sowie der Regulation von Proteinreifung und ‑transport verknüpft. Eine gestörte ER‑Homöostase unter Beteiligung von FKBP11 wurde in Zusammenhängen chronischer Entzündung, der Differenzierung von Immunzellen und stressassoziierter Pathobiologie untersucht, in denen sekretorische Belastung und Proteostase‑Kapazität verändert sind.
FKBP11 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FKBP11-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FKBP11 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FKBP11-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FKBP11-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.