Plásmido Doble Nickase (m) FKBP10: sc-420366-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)FKBP10 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FKBP10 (m) y el plásmido de doble nickasa FKBP10 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Fkbp10. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FKBP10 Anticuerpo (D-4): sc-390538
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) FKBP10 | sc-420366-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) FKBP10 | sc-420366-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Fkbp10 codifica FKBP10, una peptidil-prolil cis–trans isomerasa de unión a FK506 residente en el retículo endoplásmico que actúa como chaperona específica del colágeno durante el plegamiento y la maduración del procolágeno. FKBP10 favorece el ensamblaje de la matriz extracelular al coordinar la estabilización de la triple hélice del colágeno y facilitar su secreción adecuada, integrándose en redes de proteostasis del RE que incluyen el plegamiento asistido por chaperonas y el control de calidad. En tejidos de ratón enriquecidos en matriz conectiva, la actividad de FKBP10 influye en la biosíntesis de colágeno, la organización de las fibrillas y la mecánica tisular posterior. La desregulación del procesamiento del colágeno dependiente de FKBP10 se asocia con fenotipos hereditarios del tejido conectivo y del esqueleto, lo que convierte a Fkbp10 en un objetivo relevante para estudiar mecanismos de patología impulsados por la matriz.
FKBP10 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Fkbp10 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Fkbp10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Fkbp10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Fkbp10 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.