Plásmido CRISPR de Activación (h) FKBP10: sc-405062-ACT

FKBP10 codifica la proteína de unión a FK506 10 (FKBP65), una isomerasa peptidil-prolil cis-trans residente en el retículo endoplásmico que actúa como chaperona molecular durante la biosíntesis de colágeno. Favorece el plegamiento, el ensamblaje y la maduración adecuados del procolágeno, influyendo en la organización de la matriz extracelular y en la homeostasis del tejido conectivo. La actividad de FKBP10 se integra con las vías de control de calidad de proteínas del RE y de proteostasis que regulan la secreción de matrices ricas en colágeno. La alteración genética o la desregulación de FKBP10 se asocia con fenotipos hereditarios del tejido conectivo y del esqueleto, lo que la convierte en una diana útil para estudiar el procesamiento del colágeno, la señalización impulsada por la matriz y las interacciones célula–matriz en modelos humanos.

FKBP10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FKBP10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FKBP10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FKBP10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FKBP10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FKBP10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FKBP10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FKBP10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FKBP10 en células tumorales con expresión de FKBP10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.