Plásmido CRISPR de Activación (m) Fis1: sc-426020-ACT

Fis1 (fisión 1) codifica una proteína de la membrana mitocondrial externa que actúa como adaptador para la fisión mitocondrial dependiente de DRP1, moldeando la arquitectura de la red mitocondrial en respuesta al estado metabólico y al estrés celular. Al coordinar la división mitocondrial con la distribución de orgánulos, la mitofagia y la señalización de apoptosis, Fis1 influye en la homeostasis bioenergética y en el manejo de las especies reactivas de oxígeno. El desequilibrio entre fisión y fusión en el que participa Fis1 se ha relacionado con un control de calidad mitocondrial deficiente y con la disfunción celular observada en contextos de neurodegeneración, estrés cardiometabólico e inflamación en la investigación biomédica. Por ello, Fis1 de ratón se utiliza ampliamente para estudiar las vías de dinámica mitocondrial y sus efectos posteriores sobre las decisiones del destino celular.

Fis1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Fis1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fis1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Fis1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Fis1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fis1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Fis1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fis1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fis1 en células tumorales con expresión de Fis1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.